大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)和傳代流程

　　體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞細(xì)胞周期有限；建議使用與procell配套的專用生長培養(yǎng)基和正確的操作方法進(jìn)行培養(yǎng)，以保證細(xì)胞處于理想培養(yǎng)狀態(tài)。procell實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞采用胰蛋白酶消化、神經(jīng)元特異性培養(yǎng)基培養(yǎng)、篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制制備。細(xì)胞總數(shù)約為5×105個(gè)細(xì)胞/瓶。

　　

　　大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)和傳代流程（請嚴(yán)格按照無菌操作）：

　　

　　1、從原培養(yǎng)瓶中吸出培養(yǎng)基，用PBS緩沖液潤濕細(xì)胞兩次，加入2-3ml025%胰蛋白酶消化細(xì)胞（注意消化時(shí)間，一般控制在1-2min內(nèi)）；

　　

　　2、在顯微鏡下觀察消化情況。當(dāng)細(xì)胞邊緣收縮松散貼壁時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮），去除胰蛋白酶，加入6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹干細(xì)胞層，盡量吹散細(xì)胞層；

　　

　　3、將部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿/瓶中，加入適量的*培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液打勻，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　

　　4、注意培養(yǎng)基pH值的變化，定期更換溶液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%后重復(fù)1次操作或冷凍保存。

　　

　　特別注意：如果使用公共實(shí)驗(yàn)室接觸大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗體培養(yǎng)。

　　

　　1、收到細(xì)胞后，請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基。如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%血清（原瓶培養(yǎng)基連續(xù)使用時(shí)間不超過72小時(shí)）；

　　

　　2、貼壁細(xì)胞在收到當(dāng)天不要立即消化。請更換細(xì)胞溶液，放入培養(yǎng)箱中孵育至次日進(jìn)行消化和繼代培養(yǎng)。請優(yōu)先使用直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行繼代培養(yǎng)；

　　

　　3、培養(yǎng)瓶壁破裂、漏水，請及時(shí)拍照記錄并與實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系。