在普諾賽3月30日開播的細胞培養直播課堂中，有很多同學提出各種疑問。我們篩選出具有代表性的問題，并作了詳細解答。
01 動物細胞怎么鑒定？
要根據實驗的目的以及細胞類型進行選擇。如果是人源細胞系，并且有文獻或數據庫公布對應細胞信息，則進行STR鑒定即可；如果使非人源的細胞系，可以進行種屬鑒定，并且附加一個研究方向相關的指標進行驗證，部分小鼠細胞也可以做STR鑒定，但目前數據庫不*，很多都沒有匹配數據。對于原代細胞，如果能夠確保取材無誤，僅進行特異性指標方面的檢測就可以了，方法可采用免疫熒光、流式檢測、WB檢測等。
02 發表高水平文章時，需要提供哪些文件呢？COA？STR？
目前*的細胞鑒定文件為STR鑒定，對于不適用STR鑒定方法的細胞，可以根據自己的研究方向對細胞進行驗證，方法沒有限制，一些新的技術和方法的應用能夠一定程度上提高文章的檔次。
03 原代細胞和細胞系有啥區別？
主要是傳代次數上的差異。原代細胞一般指從動物組織直接提取的細胞，而細胞系是在原代培養的基礎上經過傳代和篩選得到。另外常用的細胞系，都是經過篩選得到的穩定細胞群體，特性在進行連續性實驗時能夠保證結果更加穩定，而原代細胞的優勢則在于與機體細胞特征更加接近。
04 pc12細胞高分化后，多次傳代會影響實驗結果嗎？
PC-12（高分化）細胞是穩定的細胞系，正常傳代不會改變細胞特性，但是傳代過程中如果出現生長過度、污染等異常情況可能會導致細胞發生變化，所以建議在低代次時凍存保種。若是自行誘導建系的高分化PC-12細胞，則要看誘導后得到的細胞特性是否穩定，一般也是建議在細胞狀態穩定時凍存，避免后續長期傳代培養過程中出現意外。
05 H22的STR為啥和NIH/3T3的STR基本相似？
首先要明確一點，H22和NIH/3T3兩株細胞在特性上差異較大，混淆的概率非常小，而STR位點數據相似，可能是由于這兩株細胞本身親緣關系非常接近。由于很多品種的小鼠都是近交品系，同種小鼠本身親緣關系就比較近，這就有可能導致不同的小鼠細胞會出現位點接近的情況，這也是目前小鼠STR沒有廣泛應用的原因之一。
06 腫瘤相關成纖維細胞也需要自己鑒定吧？
做細胞鑒定需要先明確鑒定的目的。如果自己提取的腫瘤細胞或者癌旁的成纖維細胞，可以用免疫學的方法去確定得到的細胞是屬于什么類型。
07 ATCC為什么看不到HSC？
HSC細胞從名稱上來看應該是原代提取細胞的簡稱，或者是簡寫的名稱，并沒有寫全。通用的標準細胞系中，沒有HSC這株細胞的信息。另外，ATCC并沒有收錄所有種類的細胞系，很多國內建系的細胞也無法查到，可以參考PPT中講到的查詢方法，多查幾個細胞庫的資源看看。
08 細胞系具有無限增殖的能力，正常的細胞培養成細胞系之后，那不是很多蛋白的表達都改變了，做蛋白質差異表達分析的不是就不準了嗎？
細胞系具有無限增殖的能力，同時它的另一個要求是穩定傳代。如果是在培養中或者經過篩選得到另外一種特性的細胞，則可以定義為一株新的細胞系；如表達/不表達某某蛋白的細胞，在不經過特殊處理的情況下，傳代過程中細胞發生變異的概率極低。培養條件不改變的情況下，短期內不需要擔心蛋白表達發生變化。
09 BGC胃癌細胞是不是也是污染了？
如果指的是BGC-823細胞，這株細胞確實是建系時被Hela污染的，相關信息可以在Expasy網站上查到。
10 在肺泡灌洗液找到了一組細胞，但是我們想鑒定一下到底是什么細胞，有什么辦法嗎？
先推斷可能的細胞種類，再根據這些種類選擇對應的指標進行鑒定。如肺泡灌洗液中最可能出現的就是巨噬細胞或脫落的上皮細胞，根據這些種類細胞的指標進行鑒定即可。
11 雞細胞怎么做鑒定？
確定雞的種屬可以用PCR法，設計種屬特異性的引物進行鑒定；要確定細胞的類型可以用免疫學的方法，選擇對應的抗體進行鑒定。
12 從小鼠原代細胞系中制備可以傳代的細胞系怎樣最快？
從原代培養的細胞建立細胞系，可以通過病毒基因轉染、端粒酶激活等方法。
13 對細胞系進行轉染質粒敲除，敲除后的細胞系可以繼續傳代嗎？
有文獻研究表明，即使敲除了永生化過程中導入的相關基因后，細胞不會停止繼續增殖的情況，反而在細胞特異性分化、分泌代謝等方面趨于成熟。也就是說，即使敲除了轉染的基因，細胞系也可以繼續傳代。
4月直播課堂將于4月28日開播，記得關注普諾賽公眾號哦~
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